Тропизм и магнетизм глины Природная глина обладает удивительной способностью? тропизмом, то есть «притягивается» к пораженным участкам тела, способствуя регенерации больных клеток. Глина легко поддается магнетизации: ее можно зарядить мыслеобразами на исцеление, и

Тропизм [вирусов] host range, tropism - круг хоязев, тропизм [вирусов].

Совокупность штаммов бактерий, типов клеток или видов одно- и многоклеточных организмов, на которых может размножаться вирус определенного вида (штамма); К.х. ограничивается теми клетками, которые экспрессируют рецепторы, используемые вирусами для проникновения в клетку (см. <amphotropic virus >, <ectotropic virus >).

(Источник: «Англо-русский толковый словарь генетических терминов». Арефьев В.А., Лисовенко Л.А., Москва: Изд-во ВНИРО, 1995 г.)

Белки поверхности клеток, на к рых происходит специфическое связывание вирионного белка (вирусного рецептора, антирецептора), за к рым следует проникновение вируса в клетку. Определяют тканевый тропизм вирусов. У части клеток Р. отсутствуют, у… … Словарь микробиологии

круг хозяев - тропизм [вирусов] Совокупность штаммов бактерий, типов клеток или видов одно и многоклеточных организмов, на которых может размножаться вирус определенного вида (штамма); К.х. ограничивается теми клетками, которые экспрессируют рецепторы,… … Справочник технического переводчика

Host range. См. тропизм [вирусов]. (Источник: «Англо русский толковый словарь генетических терминов». Арефьев В.А., Лисовенко Л.А., Москва: Изд во ВНИРО, 1995 г.) …

Tropism . См. тропизм [вирусов]. (Источник: «Англо русский толковый словарь генетических терминов». Арефьев В.А., Лисовенко Л.А., Москва: Изд во ВНИРО, 1995 г.) … Молекулярная биология и генетика. Толковый словарь.

Круг хоязев. См. тропизм [вирусов]. (Источник: «Англо русский толковый словарь генетических терминов». Арефьев В.А., Лисовенко Л.А., Москва: Изд во ВНИРО, 1995 г.) … Молекулярная биология и генетика. Толковый словарь.

У этого термина существуют и другие значения, см. Тропизм (значения). Тропизмы (от греч. τροπος поворот, направление) реакция ориентирования клетки, то есть направление роста или движения клеток относительно раздражителя (химического … Википедия

ВИРУС - (лат. virus яд), термин, в широком смысле употребляемый для обозначения всякого живого возбудителя инфекционных б ней и заменивший более старый термин «contagium vivum» (Kircher). Напр., говорят: В. брюшного тифа, В. дифтерии. Но чаще … Большая медицинская энциклопедия

- (Arboviruses) – класс РНК–содержащих вирусов, покрытых оболочкой. Переносятся членистоногими (комарами, клещами, москитами и др.). Возбудители клещевого энцефалита, желтой лихорадки и др. болезней человека и животных. (

Обработка плотного материала, содержащего вирусы, начинается с растирания его в ступке или измельчения в специальных аппаратах гомогенизаторах. Затем готовится 10% взвесь в солевом растворе, которую центрифугируют при 2000-3000 об/мин в течение 15-30 минут для осаждения крупных частиц. Вирусы остаются в надосадочной жидкости, которую и подвергают дальнейшему исследованию.

Жидкий виру с со держащий материал непосредственно центрифугируют и также получают надосадочную жидкость.

Уничтожение посторонней микрофлоры. Если есть сомнения в бактерияогической стерильности исследуемой вируссодержащей надосадочной жидкости, к ней добавляют антибиотики, чтобы уничтожить посторонние микроорганизмы. Антибиотики не влияют на вирусы, и они охраняют своюжизнеспособность. Применяют пенициллин и стрептомицин (200 1000 ЕД/мл) и нистатин (20 ЕД/мл). В настоящее время, в связи с большим распространением штаммов, резистентных ко многим антибиотикам, предпочитают использовать различные антибиотики широкого спектра действия и их сочетания (например тетрациклин, оксациллин, гентамицин и др.). Как правило" достаточно 30-60 минут контакта для бактерицидного действия но тем не менее, необходим посев материала на питательную среду для контроля на бактериологическую стерильность. Освобождённую от посторонней микрофлоры вируссодержащую жидкость используют для дальнейших исследований.

Концентрация вирусов. Если предполагают, что исследуемый материал содержит малое количество вирусов, его подвергают предварительной концентрации путем двукратного центрифугирования: сперва при 2000-3000 об/мин в течение 20 минут осаждают крупные частицы, а затем содержащую вирусы надосадочную жидкость подвергают ультрацентрафугированию при 40000 об/мин в течение часа и получают желеобразный осадок, где сконцентрированы вирусы.

Примеры взятия и обработки некоторых часто исследуемых материалов от больных вирусными инфекциями:

Смыв из носоглотки. Больной прополаскивает рот (утром до приёма пищи и лекарств) стерильным физиологическим раствором или раствором Хенкса в объеме 10 мл. Смыв помещают во флакон и доставляют в лабораторию в термосе со льдом. Далее смыв центрифугируют при 2000 об/мин в течение 15 минут, к полученной надосадочной жидкости добавляют антибиотики, и через 30-60 минут материал готов для дальнейшего исследования.

Испражнения в количестве 2-5 г помещают во флаконы, закрывают резиновыми пробками и доставляют в лабораторию в термосе со льдом. В лаборатории пробу разводят 1:10 раствором Хенкса, гомогенизируют в баночке с бусами путём встряхивания, затем проводят центрифугирование при 2000-3000 об/мин в течение 30 минут. К надосадочной жидкости добавляют антибиотики значительной концентрации. После 30-60 минутного контакта проводят высев в бульон для бактериологического контроля на стерильность.

До получения ответа надосадочную жидкость сохраняют в замороженном состоянии, а затем используют её для выделения вируса.

Методы очистки вирусов

Для проведения некоторых вирусологических исследований, например, электронномикроскопмческих. а также для изучения физико-химических свойств вирусов, необходимо иметь их высоко очищенные препараты, не содержащие посторонних примесей. Такой очистке подвергают вируссодержащие материалы, предварительно сконцентрированные путём двукратного центрифугирования при различных скоростях. Дополнительную очистку осуществляют различными физико-химическими методами.

Дифференциальное центрифугирование. Метод разделения частиц разных размеров по различной скорости их осаждения. При этом методе многократно чередуется малая (2000-3000 об/мин) и большая (40000-50000 об/мин) скорости центрифугирования вируссодержащего материала. Вирус оказывается то в надосадочной жидкости (при малых скоростях), то в осадке (при больших скоростях), который ресуспензируют и снова подвергают центрифугированию. Таким путём достигают высокой степени очистки вируса.

Центрифугирование в градиенте плотности. Применяют для очистки вирусов и определения их плотности. При этом методе в центрифужную пробирку слоями наливают растворы вещества (например, сахарозы), имеющие разную плотность, причём самую высокую плотность (выше, чем ожидаемая плотность вируса) создают на дне пробирки, к поверхности плотность постепенно убывает. Очищаемую вируссодержащую взвесь наслаивают сверху. Во время центрифугирования частицы различных плотностей распределяются в разных слоях раствора в виде отдельных зон. Вирусы, имеющие определённую плотность, отличную от плотности тканевых частиц, распределяются в одной из зон и могут быть выделены в чистом виде.

Фильтрование вируссодержащей жидкости через колонки, заполнение сефадексом (декстриновый гель). Разделяющие свойства такой колонки основаны на том, что частицы разной величины проходят через неё с различной скоростью, причём крупные быстрее мелких. Собирая отдельные порции фильтрата, в одной из них получают очищенный вирус.

Адсорбция вирусов на различных адсорбентах последующей элюцией. Подобрав определённые условия, удаётся сорбировать вирус на некоторых веществах (ионообменных смолах, бентионите, гипсе и др.), а затем извлечь их (элюция), пр и этом примеси остаются на адсорбенте, а в растворе оказывается очищенный вирус.

Применяют и другие методы очистки, например, осаждение вирусов алкоголем, высаливание и др.

Если необходима дальнейшая очистка вируса или нужно изучить составляющие его компоненты, применяют различные методы фракционирования, то есть разделение изучаемого препарата вируса на несколько фракций, после чего исследуют каждую из них отдельно. Для фракционирования используют электрофорез, хроматографию, ионообменные смолы.

В связи с тем, что вирусы являются патогенами внутриклеточными, каждый представитель мира вирусов имеет тропность к определенному типу клеток.

Тропизм вируса определяется наличием на клетке - мишени рецептора для данного вируса, а также возможность генома вируса встроиться в геном клетки. Рецепция в свою очередь определяет: а) конкретный вирус взаимодействует только с определенными рецепторами, б) на клетке могут быть рецепторы для различных типов вирусов и в) рецепторы для определенного вируса могут быть на клетках различных типов. Рецепторную функцию выполняют различные структуры (лиганды): белки, липиды, углеводные компоненты белков и липидов..

Выбор лабораторных животных зависит от вида вируса. Лабораторные животные являются биологической моделью. Иногда приходится проводить 3-5 «слепых», бессимптомных пассажей, прежде чем удастся адаптировать вирус к лабораторным условиям. Однако, к некоторым вирусам лабораторные животные не чувствительны, в этом случае приходится использовать естественно восприимчивых животных. Как, например, при чуме свиней и инфекционной анемии лошадей.

Выбор метода заражения лабораторных животных зависит от тропизма вируса. Так, при культивировании нейротропных вирусов животных заражают в мозг; респираторных интранозально, интратрахеально; дерматропных - подкожно и внутрикожно. Заражение производят с соблюдением правил асептики и антисептики. Различают много способов введения вируссодержащего материала в организм животных: - Подкожный; - Интрацеребральный; - Внутрикожный; - Интраперитониальный; - Внутримышечный; - Интраокулярный; - Внутривеннвй; - Интранозальный; - Алиментарный;

После заражения животных метят, помещают их в изолированный бокс и ведут наблюдение в течение 10 суток. Гибель животного в первые сутки после заражения считается неспецифичной и в дальнейшем не учитывается. 3 признака указывают на результативность заражения: - наличие клинических признаков - гибель животного - патологоанатомические изменения (величины, формы, цвета и консистенции органа)

Культивирование вирусов на куриных и перепелиных эмбрионах в последнее время получило широкое распространение как один из наиболее простых и надежных методов культивирования и диагностики многих вирусов и некоторых бактерий - бруцеллы, риккетсии, вибрионы. Многие вирусы человека и животных способны культивироваться в развивающихся куриных эмбрионах. Эмбриональная ткань, особенно оболочки эмбриона, богатые тканями зародышевого эпителия, является благоприятной средой для размножения многих вирусов. Вирусы, имеющие эпителиотропные свойства (оспа, ИЛТ и др.), успешно развиваются на хорионаллантоисной мембране, вызывая макроскопически видимые изменения. Различные представители миксовирусов (грипп, болезнь Ньюкасла, чума плотоядных и др.), вирусы инфекционного бронхита, гепатита утят, арбовирусы и др. хорошо размножаются в эмбрионе при введении материала в аллантоисную полость. Некоторые вирусы успешно культивируются в желточном мешке.

Методы заражения эмбрионов:

(Наиболее часто используют заражение в аллантоисную полость и на хорионаллантоисную оболочку, реже – в амниотическую полость и в желточный мешочек и совсем редко – в тело зародыша и в кровеносные сосуды ХАО. Выбор метода определяется тропизмом вируса, а также целью заражения. При любом методе заражения вводят 0,1–0,2 мл инфекционного материала.)

1.Заражение в аллантоисную полость. При заражении этим методом хорошо размножаются вирусы гриппа, ньюкаслской болезни, ринопневмонии лошадей, везикулярного стоматита и др. Существует несколько вариантов метода.

Первый вариант . Эмбрион фиксируют вертикально тупым концом вверх. В скорлупе на стороне зародыша, а иногда с противоположной зародышу стороны на 5–6 мм выше границы воздушной камеры делают отверстие диаметром около 1 мм. Иглу вводят параллельно продольной оси на глубину 10–12 мм. После инъекции вируссодержащего материала иглу извлекают, а отверстие в скорлупе закрывают каплей расплавленного стерильного парафина.

Второй вариант. Сделанное в скорлупе над воздушной камерой отверстие используют лишь для выхода части воздуха. Отверстие же для самого заражения делают на участке бессосудистой зоны хорионаллантоисной оболочки (ХАО) со стороны зародыша. Иглу вводят на глубину не более 2–3 мм. Инъецируют инфицирующую жидкость в объеме 0,1–0,2 мл и закрывают отверстие парафином

2. Заражение на хорионаллантоисную оболочку . Этот метод заражения куриных эмбрионов чаще используют для культивирования эпителиотропных и пантропных вирусов оспы, инфекционного ларинготрахеита птиц, чумы плотоядных, болезни Ауески, катаральной лихорадки овец и др.

Такое заражение может быть выполнено через естественную или искусственную воздушную камеру.

Для заражения через естественную воздушную камеру эмбрион помещают в штатив вертикально тупым концом вверх и в скорлупе против центра воздушной камеры вырезают круглое окно диаметром 15–20 мм. Через это окно пинцетом снимают подскорлупную оболочку. На обнажившийся участок ХАО наносят 0,2 мм вируссодержащей суспензии, отверстие закрывают лейкопластырем или реже покровным стеклом, укрепив его расплавленным парафином.

Заражение через искусственную воздушную камеру применяют чаще первого, так как оно обеспечивает контакт вируссодержащего материала с большей поверхностью ХАО и, следовательно, ведет к образованию большего количества вируса.

Для заражения эмбриона этим методом его помещают в штатив горизонтально зародышем вверх. В скорлупе делают два отверстия: одно небольшое над центром воздушной камеры (предназначено для отсасывания из нее воздуха), а другое диаметром 0,2–0,5 см сбоку, со стороны зародыша. Сложность метода в том, что, делая второе отверстие, необходимо осторожно снять вначале кусочек скорлупы, затем скользящим движением, не повреждая ХАО, сдвинуть подскорлупную оболочку в сторону так, чтобы через образовавшийся дефект мог пройти воздух. После этого резиновой грушей через первое отверстие отсасывают воздух из естественной воздушной камеры (рис. 19, а).В результате через боковое отверстие наружный воздух устремляется внутрь, образуя искусственную воздушную камеру, дном которой является ХАО

Через боковое отверстие на поверхность ХАО наносят инфекционную жидкость и отверстие закрывают кусочком лейкопластыря. Закрывать первое отверстие нет необходимости, так как внутренний листок подскорлупной оболочки при этом методе заражения не нарушается и продолжает выполнять роль барьера для микрофлоры окружающей среды.

Дальнейшую инкубацию эмбрионов, зараженных этим методом, проводят в горизонтальном положении боковым отверстием вверх.

3.Заражение в желточный мешок. Большей частью им пользуются для размножения хламидий, а также вирусов болезни Марека, ринопневмонии лошадей, катаральной лихорадки овец и др. Заражают эмбрионы 5–7-дневного, а иногда и 2–3-дневного возраста (вирус лихорадки долины РИФ). Используют два варианта заражения.

Первый вариант. Эмбрионы помещают в штатив в вертикальном положении. Делают отверстие в скорлупе над центром воздушной камеры и вводят иглу на глубину 3,5–4 см под углом 45° к вертикальной оси в направлении, противоположном месту нахождения зародыша

Второй вариант. Иногда аналогичный путь заражения осуществляется на горизонтально укрепленном в штативе эмбрионе; при этом зародыш находится внизу, а желток–над ним. Отверстие в скорлупе закрывают каплей расплавленного парафина.

4.Заражение в амниотическую полость. Для этой цели используют эмбрионы 6–10-дневного возраста. Метод используется при культивировании вирусов гриппа, ньюкаслской болезни, ринопневмонии лошадей и др. Есть два способа заражения.

Закрытый способ . Заражение проводят в затемненном боксе. Яйцо помещают на овоскопе в горизонтальном положении зародышем вверх. Через отверстие в скорлупе над воздушной камерой вводят иглу с затупленным концом по направлению к зародышу. Доказательством того, что игла проникла в амнион, служит движение тела зародыша в направлении передвижения.

Открытый способ. Скорлупу над воздушной камерой срезают так, чтобы образовалось окно диаметром 1,5–2,5 см. Через него пинцетом под контролем глаза снимают подскорлупную оболочку. Затем анатомический (14 см) пинцет с сомкнутыми браншами ведут, продавливая хорионаллантоисную оболочку по направлению к зародышу. Когда пинцет достигнет его, бранши размыкают, захватывают амниотическую оболочку вместе с ХАО и подтягивают к окну. Удерживая левой рукой пинцет с фиксированной в нем оболочкой амниона, вводят вируссодержащий материал. Далее все оболочки опускают, окно закрывают лейкопластырем и эмбрион инкубируют в вертикальном положении.

5. Заражение в кровеносные сосуды ХАО. При овоскопировании 11– 13-дневных эмбрионов отмечают крупный кровеносный сосуд. По его ходу удаляют участок скорлупы, наносят 1–2 капли спирта, что делает на некоторое время подскорлупную оболочку прозрачной. Под контролем глаза на овоскопе иглу вводят в сосуд, что подтверждается его подвижностью при небольших боковых движениях иглы. Обнаженный участок подскорлупной оболочки закрывают кусочком лейкопластыря.

Можно материал в сосуды ввести и несколько отличающимся способом: срезают скорлупу над воздушной камерой, подскорлупную оболочку смачивают спиртом и в ставшие видными сосуды ХАО вводят материал. Отверстие закрывают кусочком стерильного лейкопластыря.

6.Заражение в тело зародыша. Для заражения используют эмбрионы 7–12-дневного возраста. Известно два варианта метода.

Первый вариант. Заражают так же, как в амнион закрытым способом, с той лишь разницей, что берут острую иглу и на овоскопе показателем попадания иглы в тело считают подчинение зародыша движениям иглы.

Второй вариант . Заражают так же, как в амнион открытым способом: через окно в скорлупе подтягивают пинцетом тело зародыша. Материал вводят в головной мозг или определенные участки тела. При таких методах заражения бывает значительный процент неспецифической гибели эмбрионов.

Классификация вирусов

Вирусы могут развиваться только в определенных клетках. Тропизм вирусов - это преимущественные системы органов и тканей организма, в клетках которых вирусы способны к репродукции.

По тропизму вирусы подразделяются на:

• 1. Пантропные (в разных органах и тканях организма)
• 2. Нейротропные (в нервных клетках - вирус бешенства)
• 3. Дерматотропные (в клетках кожи - вирус оспы)
• 4. Эпителиотропные (вирус диареи. Ящура в эпителиальных клетках)
• 5. Пневмотромные (в клетках дыхательных путей, вирус гриппа, аденовирусы)
• 6. Гематотропные (в клетках крови, вирус лейкоза)

Современная классификация вирусов основана на фундаментальных (основных) свойствах вирионов, главными из которых являются:

• 1. тип нуклеиновой кислоты
• 2. морфология вириона
• 3. стратегия вирусного генома
• 4. антигенные свойства белков вируса
• 1, 2, 4 свойства внешне заметные свойства. Стратегия вирусного генома (3) (нуклеиновая кислота0 это обусловленный особенностями вирусного генетического материала, способ вирусной репродукции. Способ репродукции зависит от вирусного генома.

На основании различных признаков вирусы делятся на: семейства, подсемейства, роды и типы. Причем в основе разделения на семейства лежат два признака:

• 1. тип нуклеиновой кислоты
• 2. наличие суперкапсидной оболочки.

Существуют: 7 семейств ДНК-содержащих вирусов, 13 семейств РНК содержащих вирусов.

Названия вирусов (терминология латинская)

Семейство заканчивается на...viridae , подсемейство заканчивается на …virinae , род - на ……virus , тип - применительно к каждому вирусу. Например: Сем. Paramyxoviridae

Род Morbilivirus

Вироиды это агенты, вызывающие болезни растений. Небольшая молекула РНК замкнутая в кольцо (плазмида). РНК может быть в плазмидах. Плазмиды и вироиды совпадают. Отсюда теория, что вирусы являются сбежавшими органоидами (плазмидами).